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上海晅科生物科技有限公司
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上海晅科生物科技有限公司
入驻年限：7 年
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朱经理
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上海 奉贤区
- 业务范围：
试剂、抗体、细胞库 / 细胞培养、ELISA 试剂盒、技术服务、体外诊断、实验室仪器 / 设备、耗材
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公司新闻/正文
草鱼出血热病毒(GCHV)PCR试剂盒说明书
243 人阅读发布时间：2024-12-10 09:51
【产品名称】
草鱼出血热病毒(GCHV)核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）
商品名称：草鱼出血热病毒(GCHV)核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）
Name ：Grass Carp Hemorrhage Virus Detection Kit(Real-Time PCR Method)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】 本试剂盒适用于检测草鱼的鳃，脑、肝、肾、脾等器官组织标本中草鱼出血热病毒 RNA，适用于草鱼出血热病毒感染的辅助诊断。
【检验原理】 本试剂盒对草鱼出血热病毒基因设计特异性的引物和探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对草鱼出血热病毒 RNA 进行体外扩增检测，用于科研实验中对可疑感染者的病原学检测。
【试剂组成】 包装规格 50T/盒 GCHV 反应液 500μL×2 管 酶液 50μL×1 管 GCHV 阳性质控品 50μL ×1 管 阴性质控品 250μL ×1 管
注：
1）不同批号试剂不能混用。
2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】 ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】 取草鱼的鳃，脑、肝、肾、脾等器官组织。
【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】 1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理 每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 核酸提取 推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表： 试剂 GCHV 反应液 酶液 用量 20μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。
3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 42℃ 20min 否 2 1 cycle 95℃ 10min 否 3 40 cycles 94℃ 15sec 否 55℃ 30sec 是
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定 设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线； 可疑：检测通道 35<Ct 值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38，且曲线有明显的增长曲线， 判定为阳性，否则为阴性； 阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
6. 质控标准 阴性质控品：Ct>38 或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
7.1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
7.2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
7.3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
7.4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
7.5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
7.6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7.7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完-全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
草鱼出血热病毒(GCHV)核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）
商品名称：草鱼出血热病毒(GCHV)核酸检测试剂盒（荧光 PCR 法）
Name ：Grass Carp Hemorrhage Virus Detection Kit(Real-Time PCR Method)
【包装规格】50T/盒
【预期用途】 本试剂盒适用于检测草鱼的鳃，脑、肝、肾、脾等器官组织标本中草鱼出血热病毒 RNA，适用于草鱼出血热病毒感染的辅助诊断。
【检验原理】 本试剂盒对草鱼出血热病毒基因设计特异性的引物和探针，用一步法荧光 RT-PCR 技术对草鱼出血热病毒 RNA 进行体外扩增检测，用于科研实验中对可疑感染者的病原学检测。
【试剂组成】 包装规格 50T/盒 GCHV 反应液 500μL×2 管 酶液 50μL×1 管 GCHV 阳性质控品 50μL ×1 管 阴性质控品 250μL ×1 管
注：
1）不同批号试剂不能混用。
2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】 ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】 取草鱼的鳃，脑、肝、肾、脾等器官组织。
【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】 1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理 每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2 核酸提取 推荐采用上海晅科生物科技有限公司生产的核酸提取或纯化试剂（磁珠法或离心柱法）进行核酸提取，请按照试剂说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区） 根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；反应管数每满 10 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表： 试剂 GCHV 反应液 酶液 用量 20μL 1μL 将混合好的测试反应液分装到 PCR 反应管中，21uL/管。
3. 加样（样本处理区） 将步骤 1 提取的核酸、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀， 短暂离心。
4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 42℃ 20min 否 2 1 cycle 95℃ 10min 否 3 40 cycles 94℃ 15sec 否 55℃ 30sec 是
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定 设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断 阳性：检测通道 Ct 值≤35，且曲线有明显的指数增长曲线； 可疑：检测通道 35<Ct 值≤38，建议重复检测，如果检测通道仍为 35<Ct 值≤38，且曲线有明显的增长曲线， 判定为阳性，否则为阴性； 阴性：样本检测结果 Ct 值>38 或无 Ct 值。
6. 质控标准 阴性质控品：Ct>38 或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
7.1. 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
7.2. 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
7.3. 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
7.4. 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
7.5. 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
7.6. 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
7.7. 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
1. 所有操作严格按照说明书进行；
2. 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完-全混匀并短暂离心；
3. 反应液应避光保存；
4. 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
5. 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
6. 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
7. 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
8. 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。